Ključna razlika - AFLP vs RFLP
DNK studije imaju neizmjernu važnost u razumijevanju i određivanju filogenetskih odnosa, dijagnosticiranju genetskih bolesti i mapiranju genoma organizma. Nekoliko tehnika povezanih s analizom DNA također se koristi za identifikaciju određenog gena ili DNA sekvence u skupu nepoznate DNA. Poznati su kao molekularni biljezi. Pojačani polimorfizam duljine fragmenta (AFLP) i polimorfizam duljine fragmenta ograničenja (RFLP) dva su takva molekularna biljega (metode) razvijena u molekularnoj biologiji za otkrivanje genetskih varijacija između organizama. Obje su metode jednako važne i imaju prednosti i nedostatke. Ključna razlika između AFLP i RFLP je u tome što AFLP uključuje selektivnu PCR amplifikaciju probavljene DNA, dok RFLP ne uključuje selektivnu PCR amplifikaciju fragmenata DNA.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je AFLP
3. Što je RFLP
4. Usporedna usporedba - AFLP vs RFLP
5. Sažetak
Što je AFLP?
AFLP (polimorfizam pojačane duljine fragmenta) važan je alat u molekularnoj biologiji i opsežno se koristi u analizi genetskih varijacija. AFLP se temelji na specifičnoj PCR amplifikaciji fragmentirane genomske DNA i otkrivanju polimorfizma autoradiografima putem gel elektroforeze. AFLP široko doprinosi utvrđivanju genetskih razlika u sojevima ili usko povezanim vrstama različitih kraljevstava, uključujući biljke, životinje, bakterije i gljive. AFLP se može provesti s malim količinama nepoznatih uzoraka DNA. Ne zahtijeva prethodno znanje o redoslijedu i projektiranje sondi.
Koraci AFLP-a
- Izolacija DNA
- Probava DNA s restrikcijskim endonukleazama
- Podvezivanje ograničenih fragmenata DNA adapterima
- Selektivno pojačavanje fragmenata sa određenim restrikcijskim mjestima
- Odvajanje PCR proizvoda gel elektroforezom
- Vizualizacija matrice gela autoradiografom
AFLP je osjetljivija i ponovljiva metoda koja se može koristiti u DNK profiliranju nekoliko svojti, uključujući gljive, bakterije, biljke i životinje, bez prethodnog znanja o DNA sekvencama. Pomaže u prepoznavanju neznatnih razlika među pojedincima u populacijama zbog svoje vrlo osjetljive prirode. AFLP je također važan u mapiranju genoma, forenzičkim studijama, roditeljskim testiranjima, genotipizaciji itd.
Slika 01: AFLP
Što je RFLP?
Polimorfizmi s ograničenjem duljine fragmenta (RFLP) tehnika je koja se koristi za otkrivanje genetskih varijacija u homolognim sekvencama DNA. To je prva metoda razvijena za DNK profiliranje. Organizmi imaju jedinstvene DNK otiske prstiju ili DNK profile. RFLP služi kao važan alat za analizu varijacija između DNK profila intraspecifičnih ili blisko povezanih organizama, jer homologne sekvence imaju različita restrikcijska mjesta (mjesta) koja su jedinstvena za određeni organizam. Kada se homologna DNA probavi specifičnim restrikcijskim endonukleazama, to će rezultirati različitim DNK profilima koji su jedinstveni za svakog pojedinca. Stoga,Načelo ove metode je otkrivanje genetskih varijacija među organizmima ograničavanjem homologne DNA sa specifičnim restrikcijskim enzimima i analiza polimorfizma duljine fragmenata gelskom elektroforezom i blotiranjem. Uzorci ubrizgavanja jedinstveni su za svaki organizam i karakteriziraju određene genotipove.
Koraci RFLP-a
- Izolacija dovoljne količine DNA iz uzoraka
- Fragmentacija uzoraka DNA sa specifičnim restrikcijskim endonukleazama u kratke sekvence
- Razdvajanje dobivenih fragmenata različitih duljina elektroforezom u agaroznom gelu.
- Prijenos gelskog profila u membranu Southern blot-om
- Hibridizacija membrane s obilježenim sondama i analiza polimorfizma duljine ulomaka u svakom profilu
RFLP je vrlo važna tehnika u otkrivanju nasljeđivanja bolesti i pronalaženju rizika od pojave bolesti među članovima obitelji. RFLP se također često koristi u mapiranju genoma, identificiranju kriminalaca u forenzikama, testiranju očinstva, itd. RFLP također ima nekoliko ograničenja. RFLP zahtijeva prethodno znanje o podacima o sekvencama za projektiranje sondi za hibridizaciju. Također je potrebna izolacija dovoljne količine DNA iz uzorka za analizu, što je teško u forenzičkim studijama.
Slika 01: RRFLP mapiranje
Koja je razlika između AFLP i RFLP?
Diff Article Sredina prije tablice
ALFP vs RFLP |
|
| AFLP uključuje selektivnu PCR amplifikaciju probavljene DNA. | RFLP ne uključuje PCR, osim ako nije PCR-RFLP. |
| Znanje sekvence | |
| Nije potrebno prethodno znanje o redoslijedu. | Za projektiranje RFLP sondi potrebno je prethodno znanje o slijedu. |
| Pouzdanost | |
| Ovo je pouzdanije. | Ovo je manje pouzdano u usporedbi s AFLP-om. |
| Učinkovitost u otkrivanju polimorfizma | |
| Ovo ima veću učinkovitost u otkrivanju polimorfizma od RFLP-a. | Ovo je manje učinkovito u usporedbi s AFLP-om. |
| Trošak | |
| Ovo je malo skupo u usporedbi s RFLP-om. | Ovo je jeftinije u usporedbi s AFLP-om. |
| Prijave | |
| AFLP se primjenjuju na mapiranje genoma, uzimanje otisaka DNK, studije genetske raznolikosti, ispitivanje očinstva i forenziku | RFLP analiza važan je alat u mapiranju genoma, lokalizaciji gena za genetske poremećaje, utvrđivanju rizika od bolesti i ispitivanju očinstva. |
Sažetak - AFLP vs RFLP
AFLP i RFLP dvije su tehnike koje se koriste kao genetski biljezi za procjenu raznolikosti i procjenu genetskih odnosa u molekularnoj biologiji. AFLP služi kao učinkovita i osjetljiva metoda za otkrivanje genetskog polimorfizma među organizmima od RFLP-a. Međutim, iako obje ove metode imaju različitu učinkovitost u otkrivanju genetskih varijacija, još uvijek se koriste za DNK uzimanje otisaka prstiju i dijagnozu bolesti.
