Ključna razlika - vodoravna i okomita elektroforeza u gelu
Gel elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se koristi u genetici za razdvajanje smjesa koje sadrže DNA, RNA i druge proteine u skladu s njihovim nabojem i molekularnom veličinom. DNA, RNA ili proteini koje treba odvojiti ovom metodom prolaze kroz gel koji sadrži male pore. Molekule se kroz gel pokreću električnim poljem. Molekule prolaze kroz pore gela, a brzina kretanja je obrnuto proporcionalna njihovoj duljini. Stoga će se molekule manje molekulske veličine kretati brže od molekula veće molekulske mase. Električno polje nastaje razlikom u napunjenosti na dva kraja gela. Jedan kraj sadrži pozitivan naboj, a drugi kraj negativni naboj. Budući da su molekule DNA i RNA negativno nabijene,privući će ih prema pozitivno nabijenom kraju gela. Elektroforeza u gelu može biti dvije različite metode: vodoravna gel elektroforeza i vertikalna gel elektroforeza. U horizontalnoj elektroforezi u gelu, gel je prisutan u vodoravnoj orijentaciji i potopljen je u neprekidno pufer koji je prisutan unutar same kutije s gelom. U vertikalnoj gel elektroforezi, puferski sustav je orijentiran okomito i prekinut je s dvije komore na vrhu, a dolje s katodom, odnosno anodom. To je ključna razlika između vodoravne i okomite gel-elektroforeze.gel je prisutan u vodoravnoj orijentaciji i potopljen je u neprekidno pufer koji se nalazi unutar same kutije s gelom. U vertikalnoj gel elektroforezi, puferski sustav je orijentiran okomito i prekinut je s dvije komore na vrhu, a dolje s katodom, odnosno anodom. To je ključna razlika između vodoravne i okomite gel-elektroforeze.gel je prisutan u vodoravnoj orijentaciji i potopljen je u neprekidno pufer koji se nalazi unutar same kutije s gelom. U vertikalnoj gel elektroforezi, puferski sustav je orijentiran okomito i prekinut je s dvije komore na vrhu, a dolje s katodom, odnosno anodom. To je ključna razlika između vodoravne i okomite gel-elektroforeze.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je horizontalna gelska elektroforeza
3. Što je vertikalna elektroforeza u gelu
4. Sličnosti između vodoravne i okomite elektroforeze u gelu
5. Usporedna usporedba - Horizontalna i vertikalna elektroforeza u gelu u tabličnom obliku
6. Sažetak
Što je vodoravna gelska elektroforeza?
Horizontalna gel elektroforeza koristi osnovnu teoriju za razdvajanje molekula DNA, RNA ili proteina u skladu s njihovom molekularnom veličinom i nabojem. U ovoj tehnici gel je prisutan u vodoravnoj orijentaciji i potopljen je u pufer koji je kontinuiran. Agarozni gel koristi se za odvajanje kutije s gelom u dva odjeljka. Jedan kraj kutije s gelom sadrži anodu, dok drugi kraj sadrži katodu. Kada se primijeni struja, međuspremnik koji se koristi u ovoj tehnici omogućuje stvaranje gradijenta naboja. Kada se primijeni naboj, gel se nastoji zagrijati. Odbojnik također funkcionira kao rashladna tekućina koja održava temperaturu na optimalnim razinama. Recirkulacija tekućeg pufera sprečava stvaranje pH gradijenta. Diskontinuirani puferski sustav ne može se koristiti u vodoravnoj gel elektroforezi jer se dva odjeljka gelskog sustava povezuju s tekućim puferom. Akrilamid se koristi tijekom elektroforeze u gelu za odvajanje proteinskih smjesa.
Slika 01: Horizontalna elektroforeza u gelu
U vodoravnoj elektroforezi u gelu akrilamid se ne može koristiti jer je kutija s gelom izložena kisiku. Zbog prisutnosti kisika inhibirana je polimerizacija akrilamida, a to ometa stvaranje gela. Horizontalna gel elektroforeza metoda je bez napora koja se koristi u odvajanju DNA i RNA.
Što je vertikalna elektroforeza u gelu?
Tehnika vertikalne elektroforeze u gelu funkcionira prema primarnoj teoriji gel elektroforeze, ali smatra se da je složenija od metode vodoravne gel elektroforeze. Ova tehnika koristi diskontinuirani pufer. Katoda se nalazi u gornjoj komori, a anoda u donjoj komori. Elektrode prisutne u svakom odjeljku daju potrebno električno polje. Tanak sloj gela ulijeva se između dvije montirane staklene ploče. Stoga je gornji dio gela uronjen u gornju komoru, a donji dio gela uronjen je u komoru na dnu. Jednom kada se primijeni struja, mali dio pufera kreće se u donju komoru iz gornje komore kroz gel. Struja primijenjena u ovoj tehnici je minutnih jedinica.
Slika 02: Vertikalna elektroforeza u gelu
U vertikalnoj elektroforezi u gelu pufer teče samo kroz gel. To omogućuje preciznu kontrolu gradijenta napona tijekom faze odvajanja. Akrilamidni gel može se koristiti jer odjeljci nisu izloženi atmosferskom kisiku. Zbog manje veličine pora akrilamidnog gela, precizno razdvajanje može se postići većom rezolucijom.
Koje su sličnosti između vodoravne i okomite elektroforeze u gelu?
- Oba sustava funkcioniraju u skladu s osnovnom teorijom gel elektroforeze.
- Anoda i katoda koriste se za osiguravanje potrebnog električnog polja u oba sustava.
Koja je razlika između vodoravne i okomite elektroforeze u gelu?
Diff Article Sredina prije tablice
Horizontalna vs vertikalna elektroforeza u gelu |
|
| Horizontalna elektroforeza u gelu je tehnika elektroforeze u gelu u kojoj je gel prisutan u vodoravnoj orijentaciji. | Vertikalna elektroforeza u gelu je tehnika elektroforeze u gelu u kojoj je gel orijentiran okomito. |
| Pufer | |
| Horizontalna gel elektroforeza sastoji se od kontinuiranog pufera. | Tekući pufer je diskontinuiran u vertikalnoj elektroforezi u gelu. |
| Upotreba akrilamida | |
| Akrilamid se ne može koristiti za vodoravnu elektroforezu u gelu jer je kutija s gelom izložena atmosferskom kisiku. | Budući da gel nije izložen atmosferskom kisiku zbog dvije odvojene komore, akrilamid se može koristiti za vertikalnu elektroforezu u gelu. |
| Funkcija | |
| Horizontalna gel elektroforeza češće se koristi za odvajanje smjesa DNA i RNA, ali ne i proteina. | Vertikalna elektroforeza u gelu koristi se za odvajanje smjesa proteina. |
Sažetak - Horizontalna vs vertikalna elektroforeza u gelu
Gel elektroforeza je laboratorijska tehnika koja se široko koristi u odvajanju smjesa koje sadrže molekule DNA, RNA i proteina. Postoje dvije metode elektroforeze u gelu: horizontalna i vertikalna gel elektroforeza. U vodoravnoj gel-elektroforezi pufer koji radi djeluje kontinuirano, dok je u vertikalnoj gel-elektroforezi diskontinuiran. To je razlika između vodoravne i okomite elektroforeze u gelu. Oba sustava funkcioniraju prema zajedničkom principu elektroforeze u gelu.
Preuzmite PDF verziju elektroforeze u horizontalnom i vertikalnom gelu
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti je u izvanmrežne svrhe prema napomeni. Ovdje preuzmite PDF verziju. Razlika između vodoravne i okomite elektroforeze u gelu.
