Elektroforeza vs Elektroosmoza
Metode fizičkog odvajanja poput filtriranja, destilacije, kromatografije na koloni nisu lagane metode kada je riječ o odvajanju nekih molekula. Elektroforeza i elektro-osmoza dvije su druge tehnike odvajanja koje se mogu koristiti za odvajanje nabijenih čestica.
Što je elektroforeza?
Elektroforeza je tehnika razdvajanja molekula na temelju njihove veličine. Osnovno za ovo razdvajanje je naboj molekule i njihova sposobnost kretanja u električnom polju. Ovo je najčešća i glavna tehnika u molekularnoj biologiji za odvajanje molekula, posebno DNA i proteina. To se uglavnom koristi jer je relativno lako i jeftino. Aparat za elektroforezu može biti malo kompliciran, a priprema za njega traje neko vrijeme. Ali lako možemo napraviti aparat za elektroforezu od stvari koje imamo u laboratoriju. Tehnike elektroforeze mogu se razlikovati ovisno o našim svrhama. Jednodimenzionalnu elektroforezu možemo koristiti za odvajanje DNA ili proteina. Dvodimenzionalna elektroforeza koristi se kada su potrebni više razlučeni uzorci (kao u slučaju otiska prstima). Kao podloga za odvajanje molekula koristi se gel. Ovaj se gel može pripremiti u obliku ravnih listova ili u tubama. Osnova ovog postupka je odvajanje molekula ovisno o brzini kretanja kroz gel kada se napaja električno polje. Negativno nabijene molekule poput DNA teže putovanju prema pozitivnom polu u ovom električnom polju, dok pozitivno nabijene molekule teže putovanju prema negativnom polu. Dvije vrste gelova koriste se u elektroforezi kao agaroza i poliakrilamid. Njih dvoje imaju različite moći razrješavanja. Gel djeluje kao sito za filtriranje različitih veličina molekula. Elektrostatički naboji postavljeni u gelu djeluju kao sila. Osnova ovog postupka je odvajanje molekula ovisno o brzini kretanja kroz gel kada se napaja električno polje. Negativno nabijene molekule poput DNA teže putovanju prema pozitivnom polu u ovom električnom polju, dok pozitivno nabijene molekule teže putovanju prema negativnom polu. Dvije vrste gelova koriste se u elektroforezi kao agaroza i poliakrilamid. Njih dvoje imaju različite moći razrješavanja. Gel djeluje kao sito za filtriranje različitih veličina molekula. Elektrostatički naboji postavljeni u gelu djeluju kao sila. Osnova ovog postupka je odvajanje molekula ovisno o brzini kretanja kroz gel kada se napaja električno polje. Negativno nabijene molekule poput DNA teže putovanju prema pozitivnom polu u ovom električnom polju, dok pozitivno nabijene molekule teže putovanju prema negativnom polu. Dvije vrste gelova koriste se u elektroforezi kao agaroza i poliakrilamid. Njih dvoje imaju različite moći razrješavanja. Gel djeluje kao sito za filtriranje različitih veličina molekula. Elektrostatički naboji postavljeni u gelu djeluju kao sila. Njih dvoje imaju različite moći razrješavanja. Gel djeluje kao sito za filtriranje različitih veličina molekula. Elektrostatički naboji postavljeni u gelu djeluju kao sila. Njih dvoje imaju različite moći razrješavanja. Gel djeluje kao sito za filtriranje različitih veličina molekula. Elektrostatički naboji postavljeni u gelu djeluju kao sila.
Odvajanje ovisi o pokretljivosti iona.
F = fv = ZeE
V = ZeE / f
F = sila koja djeluje na česticu
f = koeficijent trenja
V = prosječna brzina seljenja
Z = naboj čestice koja se seli
e = osnovni naboj
E = jakost električnog polja
Potrebni uvjeti za elektroforezu relativno su jednostavni. Pri izradi gela i pokretanju uzorka koristi se pufer. U svrhu vizualizacije koriste se markeri i boje.
Što je elektroosmoza?
To je postupak kretanja tekućine kroz materijal pomoću primijenjenog električnog polja. Kretanje se može odvijati kroz porozni materijal, duž kapilare, membrane itd. To se može koristiti kao tehnika odvajanja (posebno kapilarna elektro-osmoza). Brzina tekućine linearno je proporcionalna primijenjenom električnom polju. Također ovisi o materijalu koji se koristi za izgradnju kanala i otopini koja se koristi. U sučelju su otopina i materijal dobili suprotne naboje, a to je poznato kao dvostruki električni sloj. Kada se na otopinu primijeni električno polje, dvostruki električni sloj pomiče se za nastalu Coulombovu silu. To je poznato kao elektro-osmotski tok.
Koja je razlika između elektroforeze i elektroosmoze?
• U elektroforezi se krute čestice (makromolekule poput nukleinskih kiselina ili proteina) pomiču pomoću električnog polja. Ali u elektro-osmozi tekućina se kreće.
• U elektroforezi, čvrsti materijal potpore je gel. Ali to je elektroosmoza, to može biti gel, membrana, kapilara itd.
