Ključna razlika - SDS Page vs Western Blot
Western blot tehnika je tehnika koja otkriva određeni protein iz uzorka proteina. Ova tehnika izvodi se kroz nekoliko ključnih koraka: elektroforeza u gelu, blotiranje i hibridizacija. Elektroforeza u natrijevom dodecil sulfatu u poliakrilamidnom gelu (SDS Stranica) vrsta je tehnike elektroforeze u gelu koja se koristi za odvajanje proteina prema njihovoj veličini (molekularne težine). Western blot je poseban sloj blot membrane koji se koristi za prijenos istog uzorka proteina na SDS stranici. Ključna razlika između SDS stranice i Western blot-a je u tome što SDS Page omogućuje razdvajanje proteina u smjesi, dok Western blot omogućuje otkrivanje i kvantificiranje određenog proteina iz smjese. Obje su korisne u studijama analize proteina.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je SDS stranica
3. Što je Western Blot
4. Usporedna usporedba - SDS stranica protiv Western Blot
5. Sažetak
Što je SDS stranica?
SDS Page je tehnika elektroforeze u gelu koja se koristi za odvajanje proteina. Uobičajeno se koristi u biokemiji, genetici, forenzici i molekularnoj biologiji. Nakon što se proteini ekstrahiraju iz uzorka, nanose se na gel sastavljen od SDS-a i poliakrilamida. SDS je anionski deterdžent koji se koristi za linearizaciju proteina (denaturirajući proteini) i za prijenos negativnog naboja na linearizirane proteine proporcionalne njihovoj molekularnoj masi. Poliakrilamid postaje čvrsti nosač gela. Denaturirani proteini koji su negativno nabijeni migriraju prema pozitivnom kraju aparata kroz gel. Prema veličini proteina, brzine migracije razlikuju se među proteinima i dolazi do razdvajanja. Stoga je SDS stranica korisna za odvajanje pojedinih proteina na temelju njihove veličine.
Priprema poliakrilamidnog gela za frakcioniranje proteina presudan je korak u SDS Page. Ispravna koncentracija poliakrilamida i vrsta upotrijebljenog agensa za umrežavanje snažno utječu na fizikalna svojstva gela, što čini stvarno razdvajanje različitih proteina. Za učinkovito razdvajanje treba pravilno upravljati veličinama pora gela. Međutim, SDS Page smatra se tehnikom odvajanja proteina visoke rezolucije.
SDS Page tehnika ima glavno ograničenje u analizi proteina. Budući da SDS denaturira proteine prije razdvajanja, ne dopušta otkrivanje enzimske aktivnosti, interakcije vezanja na proteine, proteinske kofaktore itd.
Slika 01: SDS stranica
Što je Western Blot?
Western blot tehnika omogućuje otkrivanje određenog proteina iz proteinske smjese i mjerenje količine i molekularne težine proteina. Western blot je membrana koja se koristi tijekom postupka blotiranja kako bi se dobila zrcalna slika proteinskih uzoraka u SDS-poliakrilamidnom gelu. Membrana koja se koristi za zapadno mrljanje uglavnom je sastavljena od nitroceluloze ili poliviniliden difluorida (PVDF). Membrana s prenesenim proteinom može se koristiti za identificiranje željenog proteina. Potrebna su visokokvalitetna antitijela za otkrivanje željenog proteina hibridizacijom. Protutijelo se veže za svoj specifični antigen i otkriva prisutnost željenog antigena, koji je protein.
Prijenos bjelančevina iz SDS poliakrilamidnog gela u Western blot izvodi se elektroblottingom. Učinkovita je i brza metoda koja uzrokuje elektroforezu proteina iz gela i prelazak na nitroceluloznu membranu (western blot).
Slika 02: Western Blot
Koja je razlika između SDS stranice i Western Blot-a?
Diff Article Sredina prije tablice
SDS Page vs Western Blot |
|
| SDS Stranica je tehnika elektroforeze u gelu. | Western blot je tehnika koja se izvodi na membrani radi otkrivanja određenog proteina iz smjese. |
| Koristiti | |
| SDS stranica omogućuje razdvajanje proteina prema njihovoj veličini. | Western blot omogućuje prijenos proteina na SDS gelu bez promjene uzorka i omogućuje hibridizaciju sa specifičnim antitijelima. |
| Mane | |
| Denaturacija proteina, skupi troškovi i prisutnost neurotoksinskih kemikalija nedostaci su ove tehnike. | Ova je tehnika dugotrajna i zahtijeva dobro iskusne osobne i specifične kontrolirane uvjete. |
Sažetak - SDS stranica vs Western Blot
SDS stranica i Western blot dvije su metode uključene u analizu proteina. SDS stranica omogućuje jednostavno razdvajanje proteina na gelu u skladu s njihovom molekularnom težinom. Western blot pomaže u potvrđivanju prisutnosti i količine određenog proteina hibridizacijom sa specifičnim antitijelima. To je razlika između SDS stranice i western blota.
