Ključna razlika - SDS stranica protiv matične stranice
SDS i izvorna stranica dvije su vrste tehnika elektroforeze u poliakrilamidnom gelu koje se koriste u molekularnoj biologiji. Ključna razlika između SDS stranice i matične stranice je vrsta poliakrilamidnog gela koji se koristi. Na SDS stranici se koristi denaturirajući gel, pa se molekule odvajaju na temelju njihove molekularne težine. Suprotno tome, u Native Page-u se koriste nedenaturacijski gelovi. Stoga se molekule odvajaju na temelju njihove veličine, naboja i oblika.
Elektroforeza u poliakrilamidnom gelu (Stranica) koristi gel izrađen polimerizacijom monomera akrilamida s metilen-bizakrilamidom. Poliakrilamid je čvršći i postojaniji na toplinu od agaroze. Poliakrilamidni gelovi imaju manju veličinu pora što omogućuje učinkovito odvajanje proteina. Postoje dvije glavne vrste postavki stranice, a to su SDS stranica i Izvorna stranica. SDS Page ili natrijev-dodecil-sulfat-poliakrilamidni gel-elektroforeza razdvajaju proteine na temelju njihove molekularne težine. Gelovi za denaturaciju koriste se u SDS stranici. Native Page koristi gelove bez denaturacije i razdvaja proteine na temelju njihove veličine, naboja i oblika (3D konformacija).
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je SDS stranica
3. Što je matična stranica
4. Sličnosti stranice SDS-a i matične stranice
5. Usporedba - Usporedba SDS-a i matične stranice u tabličnom obliku
6. Sažetak
Što je SDS stranica?
SDS Stranica je najčešća elektroforetska tehnika koja se koristi za odvajanje proteina na temelju njihove molekularne težine. Gel se pravi dodavanjem SDS-a (natrijevog dodecil sulfata), koji je deterdžent. SDS proteze protezira u monomere. SDS je anionski deterdžent. Stoga dodaje neto negativni naboj proteinima u širokom rasponu pH. Kada se neto negativni naboj prenese na molekule proteina, zbog promjene naboja, složene se strukture razgrađuju. Zbog negativnog naboja, proteini se privlače prema pozitivnom kraju. Tako molekule s nižom molekulskom težinom putuju brže na matrici gela i mogu se promatrati blizu anode, dok se bjelančevine veće molekulske mase promatraju bliže jamicama.
Slika 01: SDS stranica
SDS koji se veže na polipeptidni lanac proporcionalan je njegovoj relativnoj molekularnoj masi. Stoga se molekularna masa može odrediti i putem SDS stranice. Bojenje SDS Page gelova vrši se bojanjem bromofenol plavom bojom. Primjene SDS stranice šire se u većoj mjeri gdje se može koristiti za procjenu relativne molekulske mase i određivanje relativne količine proteina u smjesi proteina. SDS stranica se također može koristiti za određivanje raspodjele proteina u smjesi proteina. SDS Stranica se također primjenjuje za pročišćavanje i procjenu proteina. Koristi se kao preliminarni postupak za Western blot i hibridizaciju, koji se pak koristi za mapiranje i identifikaciju proteina.
Što je matična stranica?
Elektroforeza nativnog poliakrilamidnog gela (Native Page) koristi nedenaturacijski gel. Stoga se SDS ili bilo koje drugo sredstvo za denaturaciju ne dodaje u matricu gela. U Native Pageu odvajanje proteina temelji se na naboju i veličini proteina. Stoga pokretljivost proteina ovisi o napunjenosti i veličini proteina.
Naboj proteina ovisi o bočnim lancima aminokiselina. Ako su bočni lanci negativno nabijeni, protein će primiti ukupni negativni naboj i obrnuto. Proteini zadržavaju 3D konformaciju zbog presavijanja koje se događa. Preklapanje je rezultat nekoliko vrsta veza u proteinima kao što su disulfidne veze, hidrofobne interakcije i vodikove veze. Stoga, ako se nativna stranica nosi s neutralnim pH, proteini će se odvojiti prema molekularnom obliku proteina. Stoga se Native Page može koristiti kao osjetljiva tehnika za otkrivanje promjene u naboju ili konformaciji proteina.
Glavna prednost izvorne stranice je što se protein korišten za analizu stranice može oporaviti u izvornom stanju nakon analize stranice, jer protein ne ometa tijekom postupka. Native Page je relativno visoka propusna tehnika, a stabilnost proteina je povećana.
Slika 02: Izvorna stranica
Po završetku postupka gela, gel Native Page može se vidjeti bojanjem bromofenol plavom bojom ili bilo kojim drugim prikladnim reagensom za bojanje. Primjene Native Page-a uključuju razdvajanje kiselih proteina, uključujući glikoproteine, poput humanog rekombinantnog eritropoetina, ili identifikaciju proteina prisutnih u goveđem serumskom albuminu (BSA).
Koje su sličnosti između stranice SDS-a i matične stranice?
- I SDS Page i Native Page sustavi koriste poliakrilamidni gel kao matricu gela.
- Obje se koriste za odvajanje i identifikaciju proteina.
- Oboje koriste elektroforetsku pokretljivost za odvajanje spojeva.
- Obje se mogu izvesti vertikalno ili vodoravno (uglavnom kao vertikalne postavke stranice jer je duljina izvođenja veća).
- Uređaj za elektroforezu, uključujući spremnik za gel, češljeve i napajanje potreban je za rad obje tehnike.
- Vizualizacija gela može se obaviti metodama bojenja u obje tehnike.
Koja je razlika između SDS-ove i matične stranice?
Diff Article Sredina prije tablice
SDS stranica protiv matične stranice |
|
| SDS Page ili natrij-dodecil sulfatna stranica razdvaja proteine na temelju njihove molekularne težine i koristi denaturacijski gel. | Native Page koristi gelove bez denaturacije i razdvaja proteine na temelju njihove veličine, naboja i oblika (3D konformacija). |
| Vrsta gela | |
| Na SDS-stranici koristi se denaturirajući gel. | Na matičnoj stranici koristi se gel bez denaturacije. |
| Prisutnost SDS-a | |
| SDS je prisutan kao deterdžent za dodavanje negativnog naboja na uzorak na SDS stranici. | SDS nije prisutan na matičnoj stranici. |
| Osnova za razdvajanje | |
| Razdvajanje proteina ovisi o molekularnoj težini proteina na SDS stranici. | Razdvajanje ovisi o veličini i obliku proteinske molekule na izvornoj stranici. |
| Stabilnost proteina | |
| Stabilnost proteina je na SDS stranici niska. | Stabilnost proteina je visoka na izvornoj stranici. |
| Oporavak izvornog proteina | |
| Nije moguće jer je denaturirano na SDS stranici. | Moguće na izvornoj stranici. |
Sažetak - SDS stranica protiv matične stranice
SDS Page i Native Page dvije su vrste tehnika elektroforeze u poliakrilamidnom gelu koje se koriste za odvajanje proteina. SDS stranica tretira se deterdžentom zvanim SDS. SDS daje ukupni negativni naboj proteinu, što rezultira denaturacijom proteina. Stoga se proteini odvajaju na temelju njihove molekularne težine. Suprotno tome, tehnika Native Page ne koristi nikakvo sredstvo za denaturaciju. Stoga se bjelančevine ili odvajaju na temelju njihove veličine ili oblika. To je razlika između SDS stranice i izvorne stranice.
