Ključna razlika - papir vs tanki sloj vs kromatografija na stupcu
Papirna kromatografija, tankoslojna kromatografija i kromatografija na stupcu tri su vrste kromatografskih tehnika. Ključna razlika između papirnate kromatografije, tankoslojne kromatografije i kromatografije na stupcu temelji se na vrsti stacionarne faze koja se koristi u tehnici kromatografije. Kromatografija papira koristi celulozni papir kao stacionarnu fazu, tankoslojna kromatografija koristi aluminijev oksid ili silikagel kao stacionarnu fazu, dok kolonska kromatografija koristi kolonu napunjenu odgovarajućim matriksnim materijalom kao stacionarnu fazu.
U procesu odvajanja i identifikacije biomolekula poput proteina i ugljikohidrata, kromatografija je važna biofizička tehnika koja se koristi. Kromatografija razdvaja spojeve na temelju njihove topljivosti, veličine i naboja. Na temelju mehanizma razdvajanja, kromatografija koristi mehanizme kao što su izmjena iona, apsorpcija, razdvajanje i isključivanje veličine, a postoje tri kromatografske tehnike; naime, papir, tanki sloj i kromatografija na stupcu. Kromatografija na papiru temelji se na adsorpciji čvrstog i tekućeg spoja i topljivosti spoja, a kao stacionarnu fazu koristi celulozni papir. Tankoslojna kromatografija temelji se na čvrsto-tekućoj adsorpciji molekula. Ima stacionarnu fazu koja je obično izrađena od glinice ili silika gela i mobilnu fazu koja je otapalo. Kromatografija na stupcu koristi kolonu napunjenu matricom koja se koristi za odvajanje molekula uglavnom na temelju njihove veličine, afiniteta ili naboja.
SADRŽAJ
1. Pregled kromatografije i ključna razlika
2. Što je papirnata kromatografija
3. Što je tankoslojna kromatografija
4. Što je stupacna kromatografija
5. Sličnosti papira, tankog sloja i kolonske kromatografije
6. Usporedna usporedba - Paper vs Thin Layer vs Kromatografija na stupcu u tabličnom obliku
7. Sažetak
Što je papirna kromatografija?
Papirna kromatografija je najjednostavnija vrsta kromatografije koja se koristi i ne koristi se za opsežna istraživanja. Uglavnom se koristi u studentskim laboratorijima za identificiranje biomolekula poput aminokiselina i ugljikohidrata prisutnih u smjesama. Kromatografija na papiru koristi stacionarnu fazu koja se izrađuje od celuloznog papira ili Whatman filtrirnog papira i mobilnu fazu koja se obično priprema pomoću organskih otapala kao što je n-butanol itd. Stacionarna faza zasićena je vodom, čineći nepokretnu fazu tekućom. Dakle, kada se spojevi uoče i puste da teku u prisutnosti pokretne faze, ovisno o topljivosti spojeva, oni se odvajaju. Dakle, nakon razvoja kromatograma, može se izvršiti bojanje kako bi se odredila duljina ciklusa svakog spoja. Time se može izračunati retencijski faktor.
Slika 01: Kromatografija na papiru
Kromatografija papira može se dalje klasificirati kao hromatografija na uzlaznom papiru i silazna kromatografija na papiru, ovisno o smjeru tekućeg otapala.
Što je tankoslojna kromatografija?
Tankoslojna kromatografija ili TLC je uobičajena tehnika za identificiranje različitih aminokiselina prisutnih u smjesi ili za identifikaciju proteina. Tehnika odvajanja temelji se na adsorpciji krutina-tekućina. Tijekom tankoslojne kromatografije, ploča izrađena od glinice ili silikagela koristi se kao stacionarna faza. Smjesa otapala razlikuje se ovisno o zahtjevu i može koristiti različite kombinacije organskih spojeva kao što su n-butanol, octena kiselina i voda za pripremu otapala. Spojevi koji se odvajaju uočavaju se na ploči i uranjaju u smjesu otapala. Jednom kada otapalo putuje prema gore na temelju kapilarnog djelovanja koje daje ploča, spojevi uočeni na ploči također se pomiču ovisno o njihovoj topljivosti u otapalu.
Slika 02: Tankoslojna kromatografija
Otkrivanje mrlja nakon kromatograma vrši se različitim postupcima bojenja. Neki koriste bojanje ninhidrinom, što je prilično otrovna metoda bojanja. Suvremeni tankoslojni kromatogrami koriste se fluorescentnim tehnikama za pregled kromatograma nakon trčanja. Ovisno o prijeđenoj udaljenosti, može se izračunati vrijeme zadržavanja svakog spoja. To se može koristiti za utvrđivanje vrste odvojenog spoja na temelju korištene smjese. TLC se uglavnom koristi za identificiranje aminokiselina u smjesi proteina i također za razdvajanje različitih vrsta monosaharida prisutnih u smjesi.
Što je kolonska kromatografija?
Stupacna kromatografija široki je pojam koji se koristi za opisivanje mnogih vrsta tehnika kromatografije koje koriste metodu odvajanja na bazi kolone. U kolonskoj kromatografiji koristi se fizički stupac s materijalom za pakiranje za odvajanje spojeva. Odvajanje se može temeljiti na različitim fizikalnim svojstvima koja pokazuju spojevi. Ta svojstva mogu biti naboj, veličina, 3D konformacija i kapacitet vezivanja itd. Dakle, kolona napunjena matričnim materijalom djeluje kao stacionarna faza, a pufer za ispiranje primijenjen na kolonu djeluje kao mobilna faza.
Ako su molekule odvojene na temelju veličine, materijal za pakiranje pakiran je na način da ostavlja pore za putovanje spojeva. Dakle, veće molekule koje ne mogu teći kroz pore prvo se eluiraju, dok manjim molekulama treba puno duže vrijeme da se eluiraju.
Slika 03: Stupacna kromatografija
Ako se molekule odvoje na temelju njihova naboja, stacionarna faza sadržavat će ili anion ili kation izmjenjivač na koji će se spojevi privući na temelju njihovog naboja. Tako će se tijekom koraka pranja nevezani spojevi eluirati. Nakon dodavanja pufera za eluiranje, vezani nabijeni spojevi eluirat će se. Detekcija ovih eluenta uglavnom se temelji na spektrofotometrijskim tehnikama.
Koje su sličnosti između tankog sloja papira i kromatografije na stupcima?
- Sve tanke plasti papira i kromatografija na stupcu koriste se tri tehnike za odvajanje biomolekula kao što su aminokiseline, proteini i ugljikohidrati.
- Tehnike tankog sloja papira i kromatografije na stupcu imaju mobilnu i stacionarnu fazu.
- Tehnike kromatografije tankog sloja i stupca kromatografije koriste biofizičke mehanizme za razdvajanje.
Koja je razlika između tankog sloja papira i kromatografije na stupcima?
Diff Article Sredina prije tablice
Papir vs tanki sloj vs stupac kromatografija |
|
| Kromatografija na papiru | Kromatografija na papiru je kromatografska tehnika koja se koristi za odvajanje spojeva na temelju adsorpcije tekućina-tekućina i topljivosti spoja. Kao stacionarnu fazu koristi celulozni papir. |
| Tankoslojna kromatografija | Tankoslojna kromatografija je još jedna kromatografska tehnika koja se temelji na adsorpciji molekula u krutom i tekućem stanju. Ima stacionarnu fazu izrađenu od glinice ili silikagela i otapalo kao mobilnu fazu, koje je otapalo. |
| Kromatografija na stupcu | Kromatografija na stupcu koristi kolonu napunjenu matricom koja se koristi za odvajanje molekula uglavnom na temelju njihove veličine, afiniteta ili naboja. |
| Stacionarna faza | |
| Kromatografija na papiru | Papir izrađen od nitroceluloze Whatmana koristi se kao stacionarna faza u kromatografiji papira. |
| Tankoslojna kromatografija | Aluminijev oksid ili silikagel koriste se kao stacionarna faza tankoslojne kromatografije. |
| Kromatografija na stupcu | Kolona napunjena prikladnim materijalom za pakiranje koristi se kao nepokretna faza u kolonskoj kromatografiji. |
| Mobilna faza | |
| Kromatografija na papiru | Tekuće otapalo je mobilna faza kromatografije na papiru. |
| Tankoslojna kromatografija | Tekuće otapalo pokretna je faza tankoslojne kromatografije. |
| Kromatografija na stupcu | Pufer za ispiranje je mobilna faza kromatografije na koloni. |
| Mehanizmi koji se koriste za razdvajanje | |
| Kromatografija na papiru | Kromatografija na papiru temelji se na apsorpciji krute tekućine. |
| Tankoslojna kromatografija | Tankoslojna kromatografija temelji se na apsorpciji krute tekućine. |
| Kromatografija na stupcu | Kromatografija na stupcu temelji se na izuzimanju veličine, naboju i obliku. |
| Pufer za ispiranje | |
| Kromatografija na papiru | Nije potrebna kod kromatografije na papiru. |
| Tankoslojna kromatografija | Nije potrebno za tankoslojnu kromatografiju. |
| Kromatografija na stupcu | Potrebno u kolonskoj kromatografiji. |
| Otkrivanje | |
| Kromatografija na papiru | Bojenje i određivanjem retencijskog faktora. |
| Tankoslojna kromatografija | Bojenje i određivanjem retencijskog faktora. |
| Kromatografija na stupcu | Spektrofotometrijsko određivanje. |
Sažetak - Tanak sloj papira vs kromatografija na stupcu
Kromatografija na papiru, TLC i kromatografija na stupcu tehnike su razdvajanja koje se koriste za odvajanje biomolekula kao što su proteini, aminokiseline i ugljikohidrati (uglavnom monosaharidi). Kromatografija na papiru koristi stanični papir kao stacionarnu fazu, a mehanizam odvajanja temelji se na adsorpciji krutina-tekućina. TLC također koristi mehanizme adsorpcije u krutom i tekućem stanju. Molekule su odvojene na stacionarnoj fazi, ovisno o njihovoj topljivosti u mobilnoj fazi. Kromatografija na stupcu koristi fizička svojstva kao što su veličina, oblik, naboj i molekularna težina spoja za odvajanje. Kolona napunjena matričnim materijalom djeluje kao stacionarna faza, dok pufer za ispiranje djeluje kao faza otapala. To je razlika između tankog sloja papira i kromatografije na koloni.
