PCR vs PCR u stvarnom vremenu
PCR ili polimerazna lančana reakcija revolucionarno su otkriće u modernoj molekularnoj biologiji, koje je prvi razvio kemičar Kary Mullis 1983. godine. Omogućuje pojačavanje jedne sekvence u složenoj DNA za analizu. Osnovna ideja PCR-a je da su dva početnika, koja su komplementarna suprotnim lancima DNA sekvence, orijentirana jedna prema drugoj; temeljni premazi proizvode komplementarne niti, od kojih svaka sadrži drugi temeljni premaz. Dakle, rezultat je velika količina sekvence koja odgovara DNA koja leži između dva početnika. Enzim DNA polimeraza koristi se za proširenje početnica u PCR-u. DNA polimeraza je termostabilni enzim i ima sposobnost preživljavanja na visokim temperaturama (94 do 95 ° C) koje se koriste za denaturaciju matrice DNA.
PCR uključuje tri koraka, naime, ponovljene runde denaturacije, žarenje početnica i sintezu DNA. Za izvođenje ove reakcije koristi se stroj za termocikl, tako da se može programirati za brzo i precizno mijenjanje temperatura. Primjene PCR-a su kriminalističke istrage, DNK otisak prsta, otkrivanje patogena i analiza DNA ranih ljudskih vrsta.
Što je konvencionalni PCR?
Postoje tri glavne faze konvencionalne PCR, naime; Stupanj umnožavanja DNA, odvajanje PCR-a i otkrivanje proizvoda. Odvajanje segmenata DNA obično se vrši elektroforezom u agaroznom gelu. Proizvodi se zatim boje eteiduim bromidom. Konačno, otkrivanje se postiže vizualizacijom traka na gelovima pod UV svjetlom. Stoga se konačni rezultati konvencionalne PCR ne izražavaju brojevima. Uobičajeno je da PCR može otkriti samo jedan parametar.
Što je PCR u stvarnom vremenu?
PCR u stvarnom vremenu može otkriti pojačanje proizvoda tijekom sinteze proizvoda. Razvojem tehnologije PCR je postala vrlo popularna tehnika, posebno za otkrivanje i identifikaciju bakterija u hrani. PCR u stvarnom vremenu koristi florescentni sustav boje i termocikler opremljen sposobnošću fluorescentne detekcije.
Koja je razlika između konvencionalne PCR i PCR u stvarnom vremenu?
• Konvencionalni PCR dugotrajniji je jer koristi gel elektroforezu za analizu pojačanih PCR proizvoda. Suprotno tome, PCR u stvarnom vremenu manje je vremena jer može otkriti pojačanja tijekom ranih faza reakcije.
• PCR u stvarnom vremenu prikuplja podatke u eksponencijalnoj fazi rasta PCR-a, dok tradicionalni PCR prikuplja podatke na završnoj točki reakcije.
• Rezultati krajnje točke konvencionalnog PCR-a možda nisu vrlo precizni, ali rezultati PCR-a u stvarnom vremenu vrlo su precizni.
• PCR u stvarnom vremenu osjetljiviji je od konvencionalnog PCR-a.
• Konvencionalni PCR ima vrlo lošu razlučivost, dok PCR u stvarnom vremenu može otkriti vrlo malo promjena zbog visoke razlučivosti.
• Otkrivanje krajnje točke konvencionalnog PCR-a ima kratki dinamički raspon, dok PCR otkrivanje u stvarnom vremenu ima širok dinamički raspon.
• Za razliku od konvencionalne PCR, tehnike automatskog otkrivanja nalaze se u PCR-u u stvarnom vremenu.
• Konvencionalni PCR vrlo je sofisticiran i radno intenzivan više od PCR-a u stvarnom vremenu.
• Za razliku od PCR-a u stvarnom vremenu, konvencionalni PCR ne može razlikovati mrtve i žive bakterije.
• PCR u stvarnom vremenu koristi sustav fluorescentnih boja za otkrivanje proizvoda, dok konvencionalni PCR koristi etidij bromid i UV svjetlost za vizualizaciju traka u mediju agaroznog gela.
