Ključna razlika - izravni i neizravni ELISA
Enzimski imunološki test (ELISA), poznat i kao enzimski imunološki test, serološki je test koji otkriva antitijela u krvi. Koristi se kao dijagnostički alat za otkrivanje je li pacijent bio izložen određenoj vrsti virusa ili nekom drugom zaraznom sredstvu (antigenu) i je li tijelo stvorilo antitijela protiv infekcije. ELISA također može identificirati prošle i trenutne infekcije. Stoga se ELISA često koristi kao test predkliničkog ispitivanja od strane liječnika prije dubinske analize bolesti. Ovaj se test može provesti u laboratoriju uzimajući uzorak krvi od pacijenta. Postoje dvije vrste ELISA testa: izravni ELISA i neizravni ELISA test. Ključna razlika između izravnog i neizravnog ELISA je u tome što je neizravni ELISA osjetljiviji i zahtijeva dodavanje sekundarnog protutijela, dok je izravni ELISA manje osjetljiv i koristi samo primarno protutijelo.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je izravni ELISA
3. Što je neizravni ELISA
4. Usporedna usporedba - Izravna i neizravna ELISA
5. Sažetak
Što je Direct ELISA?
ELISA je dijagnostički test bolesti koji se provodi kako bi se utvrdila prisutnost određenih antigena ili antitijela u krvi. Radi se kao test na pločici. Koristi antitijela povezana s enzimima koji se lako analiziraju. Prisutnost antigena u uzorku seruma veže se za specifična antitijela povezana s enzimima. U posljednjem koraku dodaje se specifični supstrat koji reagira s enzimom. Enzim pretvara supstrat u obojeni proizvod ili proizvod koji proizvodi signal. Promjena boje u kemijskom supstratu otkriva prisutnost određenog antitijela u uzorku seruma. Izravni ELISA test koristi samo primarno antitijelo vezano za enzim. Nakon vezivanja za antigen, brzo mijenja boju, što ukazuje na prisutnost zaraznog agensa u krvi. Međutim,intenzitet signala je slabiji u izravnom ELISA-u, jer su epitopi ograničeni na vezanje antigena. Stoga je izravni ELISA manje osjetljiv u odnosu na neizravni ELISA.
Slika 01: Izravni ELISA test
Što je neizravni ELISA?
ELISA se može provesti pomoću dvije vrste antitijela, naime; primarno antitijelo i sekundarno antitijelo. Indirektni ELISA alat koristi obje vrste antitijela za pojačavanje signala radi boljeg otkrivanja. Indirektna ELISA tehnika izvodi se na sljedeći način.
- Ploče se inkubiraju s antigenima i isperu da blokiraju nespecifično vezanje.
- Zatim se dodaju i isperu primarna antitijela.
- Dodaju se i isperu enzimski vezana sekundarna antitijela.
- Doda se supstrat i ostavi da reagira s enzimima.
- Otkrivaju se signali i utvrđuje prisutnost ili odsutnost specifičnog antigena u uzorku.
U neizravnom ELISA testu, nekoliko sekundarnih antitijela može se vezati za jedno primarno antitijelo. Sekundarna antitijela povezana su s enzimima koji se lako analiziraju. Stoga jedno vezivanje može stvoriti snažan signal zbog više interakcija. Stoga je neizravni ELISA osjetljiviji od izravnog ELISA. Međutim, neizravni ELISA može stvarati nespecifične signale zbog unakrsnih reakcija sekundarnih antitijela.
Slika 02: Neizravni ELISA test
Koja je razlika između izravnog i neizravnog ELISA?
Diff Article Sredina prije tablice
Izravni vs neizravni ELISA |
|
| Izravni ELISA manje je osjetljiv u odnosu na neizravni ELISA. | Neizravni ELISA osjetljiviji je. |
| Vrijeme oduzeto | |
| Izravni ELISA test brz je postupak. | Neizravni ELISA zahtjeva puno vremena. |
| Upotreba antitijela | |
| Samo jedna vrsta antitijela (Primarna antitijela) koristi se u izravnom ELISA. | Primarna i sekundarna antitijela koriste se za neizravni ELISA. |
| Veza s enzimima | |
| Primarna antitijela povezana su s enzimima. | Sekundarna antitijela povezana su s enzimima. |
| Unakrsna reaktivnost drugih antitijela | |
| Izravni ELISA uklanja unakrsnu reaktivnost drugih antitijela. | Na neizravni ELISA utječe unakrsna reaktivnost drugih antitijela. |
| Signali | |
| Signali su slabi u usporedbi s neizravnim ELISA. | Signali se pojačavaju neizravnim ELISA-om. Stoga ga je lako otkriti. |
Sažetak - Izravni vs neizravni ELISA
ELISA je biokemijska tehnika koja se uglavnom koristi u imunologiji za otkrivanje prisutnosti protutijela ili antigena u uzorku krvi pacijenta. Može se provesti kroz dva postupka poznata kao izravni ili neizravni ELISA. Izravni ELISA test koristi samo primarna antitijela za otkrivanje antigena, dok neizravni ELISA koristi i primarna i sekundarna antitijela. U izravnom ELISA-u primarna antitijela su označena, dok su u neizravnom ELISA-u sekundarna antitijela. To je razlika između izravnog i neizravnog ELISA.
