Ključna razlika - Nick Translation vs Primer Extension
Prijevod Nicka i produljenje početnice dvije su važne tehnike izvedene u molekularnoj biologiji. Ključna razlika između prevođenja nadimaka i produženja početnika je u tome što postupak prevođenja nadimaka proizvodi obilježene sonde za druge tehnike hibridizacije, dok postupak produžavanja početnika identificira određenu sekvencu RNA iz smjese i otkriva informacije o ekspresiji mRNA. Obje tehnike imaju veliku važnost i rutinski se izvode u molekularnim istraživačkim laboratorijima.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je Nick prijevod
3. Što je produžetak primera
4. Usporedba - Usporedba Nick vs Primer produžetka
5. Sažetak
Što je Nick Translation?
Nickov prijevod je važna tehnika koja se koristi za pripremu obilježenih sondi za različite molekularno-biološke tehnike poput blotiranja, in situ hibridizacije, fluorescentne in situ hibridizacije itd. To je in vitro metoda obilježavanja DNA. DNA sonde koriste se za identificiranje specifičnih sekvenci DNA ili RNA. Uz pomoć obilježene sonde mogu se označiti ili vizualizirati određeni fragmenti iz složene smjese nukleinske kiseline. Stoga se označene sonde pripremaju pomoću različitih tehnika koje se koriste za različite tehnike. Nickov prijevod jedna je od takvih metoda koja proizvodi obilježene sonde uz pomoć enzima DNaze 1 i DNA polimeraze 1.
Proces prevođenja nadimaka započinje s enzimskom aktivnošću DNaze 1. DNaza 1 uvodi ureze u fosfatnu okosnicu dvolančane DNA cijepanjem fosfodiesterskih veza između nukleotida. Jednom kada se stvori nadimak, oslobodit će se 3 'OH skupina nukleotida i na njega će djelovati enzim DNA polimeraza 1. 5 'do 3' eksonukleazna aktivnost DNA polimeraze 1 uklanja nukleotide iz usjeka prema 3 'smjeru DNA lanca. Istovremeno, polimerazna aktivnost enzima DNA polimeraze 1 djeluje i dodaje nukleotide kako bi nadomjestili uklonjene nukleotide. Ako su nukleotidi označeni, zamjena će se dogoditi obilježenim nukleotidima i označit će DNA za identifikaciju. Ova novo sintetizirana obilježena DNA može se koristiti kao sonde u raznim reakcijama hibridizacije u molekularnoj biologiji.
Slika 01: Postupak prevođenja Nicka
Što je Primer Extension?
Proširenje početnika tehnika je koja se koristi za pronalaženje specifične sekvence RNA iz smjese RNA i lociranje 5 'kraja transkripta mRNA. Također se koristi za proučavanje strukture RNA i ekspresije. Metoda produženja početnice provodi se s obilježenim početnicama ili s obilježenim nukleotidima. Ako se koriste obilježeni početnici, to isključuje potrebu obilježavanja nukleotida koji se koriste za sintezu cDNA. Nekoliko je koraka u ovoj tehnici. Počinje ekstrakcijom RNA iz uzorka. Zatim se smjesi doda označeni oligonukleotidni primer, zajedno s potrebnim sastojcima za sintezu cDNA određene sekvence RNA. Temeljni žarovi s komplementarnim redoslijedom iz smjese. Koristeći sljeđeni temeljni premaz kao predložak,enzim reverzna transkriptaza sintetizira komplementarnu DNA (cDNA) RNA sekvence. Kaljenje početnog sloja i reverzna transkripcija događaju se samo kada je u uzorku prisutan određeni slijed RNA. Napokon, kada se izvodi denaturirajuća elektroforeza u gelu, može se odrediti veličina sekvence RNA. Također je lako pronaći +1 bazu sekvence mRNA (mjesto iniciranja transkripcije) metodom produženja primera. Količina mRNA prisutna u uzorku može se kvantificirati ovom metodom ako se koristi višak početnice. Također je lako pronaći +1 bazu sekvence mRNA (mjesto iniciranja transkripcije) metodom produženja primera. Količina mRNA prisutna u uzorku može se kvantificirati ovom metodom ako se koristi višak početnice. Također je lako pronaći +1 bazu sekvence mRNA (mjesto iniciranja transkripcije) metodom produženja primera. Količina mRNA prisutna u uzorku može se kvantificirati ovom metodom ako se koristi višak početnice.
Slika 02: Proširenje temeljnog premaza
Koja je razlika između Nick Translation i Primer Extension?
Diff Article Sredina prije tablice
Nick Translation vs Primer Proširenje |
|
| Nickov prijevod je postupak koji stvara obilježene DNA sonde za razne reakcije hibridizacije. | Proširenje početnika tehnika je koja se koristi za pronalaženje specifične RNA ili za proučavanje ekspresije gena. |
| Korišteni enzimi | |
| Koriste se enzimi DNaza 1 i DNA polimeraza. | Koristi se enzim reverzne transkriptaze. |
| Važnost | |
| Nickov prijevod olakšava označavanje određene sekvence DNA. | Proširenje početnika omogućuje otkrivanje određene veličine sekvence mRNA i količine prisutne u uzorku. |
Sažetak - Nick Translation vs Primer Extension
Nickov prijevod je metoda koja se koristi za sintezu obilježenih sondi na temelju aktivnosti enzima DNaze 1 i E coli DNA polimeraze 1. To je in vitro metoda koja se koristila u laboratorijima prije različitih tehnika hibridizacije. Tijekom prevođenja nadimka, 5'-3 'eksonukleazna aktivnost DNA polimeraze 1 uklanja nukleotide ispred nadimka, a polimerazna aktivnost DNA polimeraze 1 zamjenjuje uklonjene nukleotide s označenim nukleotidima iza nadimka. Proširenje početnika metoda je koja se koristi za otkrivanje određenog prijepisa RNA iz smjese i kvantificiranje veličine i količine RNA koja vas zanima. To je razlika između prevođenja nicka i produženja početnice.
