Ključna razlika - T4 vs T7 DNA ligaza
DNA ligaza važan je enzim koji se koristi u tehnikama molekularne biologije. Djeluje kao molekularno ljepilo za spajanje nukleotida stvaranjem fosfodiesterskih veza između nukleotida. Fosfodiesterske veze nastaju između 3 'hidroksilnog kraja šećerne skupine i 5' krajnje fosfatne skupine. DNA ligaza je vitalna u procesu replikacije kako bi se pridružila Okazaki fragmentima zaostalog lanca, a tijekom mehanizama popravljanja DNA i in vitro pokusima kloniranja kako bi se spojio željeni gen od interesa za vektorski genom. Trenutno postoje dvije glavne DNA ligaze koje molekularni biolozi koriste: T4 i T7 DNA ligaze. T4 DNA ligaza jedan je od prvih enzima koji je izoliran iz T4 bakteriofaga. T7 DNA ligaza, koja je manji protein, enzim je izoliran iz T7 bakteriofaga. To je ključna razlika između T4 i T7 DNA ligaza.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Kakvo je djelovanje DNA ligaze
3. Što je T4 DNA ligaza
4. Što je T7 DNA ligaza
4. Sličnosti između T4 i T7 DNA ligaze
5. Usporedna usporedba - T4 vs T7 DNA ligaza u tabličnom obliku
6. Sažetak
Koje je djelovanje DNA ligaze?
Povezivanje DNA događa se u reakciji u tri koraka. Prvi korak je nukleofilni napad na alfa-fosfor ATP-a, generirajući kovalentni međuprodukt enzim-adenilat u kojem je AMP povezan s dušikom krajnjeg bočnog lanca lizina. U drugom koraku dolazi do nukleofilnog napada na fosfor enzima-adenilata pomoću 5'-fosfat-završene supstrate DNA, oslobađajući lizin i formirajući DNA-adenilat. U posljednjem koraku, DNA-adenilat napada 3'-OH drugog lanca DNA, oslobađajući AMP i pridružujući se polinukleotidima.
Što je T4 DNA ligaza?
T4 ligaza je prva ligaza koju su izolirali i identificirali Meselson, Weigle i Kellenberger i bila je prva proizvedena komercijalna ligaza. T4 DNA ligaza je enzim ovisan o ATP-u koji katalizira stvaranje fosfodiesterske veze. To je jedan polipeptidni lanac s 487 aminokiselinskih ostataka i ima molekulsku masu od oko 77 kDa. Optimalni pH za njegovu aktivnost nalazi se u rasponu od 7,5 - 8.
Slika 01: T4 DNA ligaza
T4 DNA ligaza, kako joj samo ime govori, prisutna je u bakteriofagu T4 i izolirana je kada je fag proizveo enzim nakon infekcije E. coli. Enzim ligatira dvolančane DNA duplekse s tupim krajevima i fragmenti koje treba vezati trebali bi biti u neposrednoj blizini.
Što je T7 DNA ligaza?
T7 ligaza je protein od 41 kDa koji proizvodi T7 bakteriofag, a izolira se infekcijom stanica E. coli. Glavna funkcija T7 ligaze je povezivanje dupleksa DNA kroz fosfodiesterske veze i spajanje obližnjih fragmenata DNA tijekom pokusa kloniranja. Optimalni pH za T7 DNA ligazu leži u rasponu od 7,0 - 7,2. T7 ligaza ovisi o ATP-u. T7 DNA ligaze također su sposobne žariti hibride DNA i RNA, što dovodi do abnormalnih konformacija tijekom transkripcije; međutim, ovaj je fenomen još uvijek u istraživanju in vitro studija.
Koje su sličnosti između T4 i T7 DNA ligaze?
- DNA ligaze T4 i T7 sudjeluju u reakciji ligacije žareći DNA duplekse kroz stvaranje fosfodiesterske veze između 3 'OH kraja i 5' fosfatnog kraja DNA fragmenta.
- Oba enzima vežu duplekse DNK tupog kraja koji su u neposrednoj blizini.
- Oba enzima ovise o ATP.
- Ti enzimi se izoliraju zarazivanjem stanica E. coli određenim bakteriofagom.
-
Primjena oba enzima uključuju:
- Molekularno kloniranje - za vezanje gena od interesa za vektor
- Popravak DNA - za popravak dvolančanih niša
- In vitro replikacija DNA
- Lančana reakcija ligaze
Koja je razlika između DNA ligaza T4 i T7?
Diff Article Sredina prije tablice
T4 vs T7 DNA ligaza |
|
| T4 DNA ligaza DNA DNA ligaza izolirana iz bakteriofaga T4 i uključena je u ligaciju susjednih fragmenata DNA putem stvaranja fosfodiesterske veze. | T7 DNA ligaza Tip DNA ligaze izoliran iz bakteriofaga T7 i uključen je u ligaciju susjednih fragmenata DNA putem stvaranja fosfodiesterske veze. |
| Veličina proteina | |
| Veličina T4 DNA ligaze je 77 kDa - veća je u usporedbi s T7 DNA ligazom. | Veličina T7 DNA ligaze je 41 kDa. |
| Optimalni pH | |
| Raspon pH koji djeluje na T4 DNA ligazu je 7,5 - 8,0. | Raspon pH koji djeluje na T7 DNA ligazu je 7,0 - 7,2. |
Sažetak - T4 vs T7 DNA ligaza
DNA ligaze su važna klasa enzima koji sudjeluju u molekularnom kloniranju kako bi proizveli rekombinantne molekule DNA koje sadrže gen od interesa. Reakcija ligacije je reakcija koja koristi energiju i u tijeku su nova istraživačka istraživanja kako bi se poboljšala točnost modulacijom dostupnih ligaza. DNA ligaze T4 i T7 dvije su vrste važnih enzima DNA ligaze koje se koriste u molekularno biološkim tehnikama. T7 DNA ligaza također je rezultat istraživanja koja su se temeljila na primarnoj ligazi izoliranoj iz E. coli zaražene T4. T7 prikazuje veću učinkovitost i preciznost u izvršavanju svoje funkcije zbog njegove manje veličine. To je razlika između T4 i T7 ligaze.
Preuzmite PDF verziju T4 vs T7 DNA Ligase
Možete preuzeti PDF verziju ovog članka i koristiti je u izvanmrežne svrhe prema napomenama o navodima. Ovdje preuzmite PDF verziju. Razlika između T4 i T7 Ligase.
