Ključna razlika - toplo i hladno tripsiniziranje
Topla i hladna tripsinizacija dvije su metode koje se koriste u enzimskoj razgradnji stanica u uzgoju životinjskih stanica. Ključna razlika između toplog i hladnog tripsiniziranja, kako sugeriraju nazivi, ovisi o temperaturi na kojoj se tripsin dodaje za staničnu razgradnju. Topla tripsinizacija odvija se u uvjetima viših temperatura (36,5 - 37 0 C), dok se hladna tripsinizacija odvija u uvjetima niskih temperatura.
Tijekom postupka primarnog uzgoja stanica životinjskih stanica koriste se tri glavne metode koje su se pokazale uspješnima. Tri metode uključuju mehaničku razgradnju stanica, enzimatsku razgradnju stanica i primarnu tehniku eksplantacije. Enzimska razgradnja stanica dovodi do izolacije stanica, a vrši se enzimom tripsinom koji razgrađuje protein. Stoga je ovaj postupak poznat pod nazivom tripsinizacija. Trippsinizacija se može provesti pod dva različita uvjeta, naime topla tripsinizacija i hladna tripsinizacija. Topla tripsinizacija metoda je tretiranja stanica s tripsinom u toplim uvjetima na temperaturi od 36,5 - 37 0C. Hladna tripsinizacija je postupak obrade tripsinom koji se odvija u hladnijim uvjetima, po mogućnosti u ledu održavajući vrlo niske temperature.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je topla tripsinizacija
3. Što je hladna tripsinizacija
4. Sličnosti između tople i hladne tripsinizacije
5. Usporedna usporedba - Toplo protiv hladne tripsinizacije u tabličnom obliku
6. Sažetak
Što je topla tripsinizacija?
Tripsinizacija se može izvršiti za razdvajanje staničnih komponenata kako bi se stanice izolirale kako bi se proizvela primarna stanična kultura. Trippsin je enzim za razgradnju proteina, a enzimska smjesa koja se koristi u tripsinizaciji može biti sirovi ekstrakt ili pročišćeni proizvod. Kaže se da je sirovi ekstrakt učinkovitiji u lizi proteina i dezintegraciji stanica, jer sadrži druge degradativne enzime.
Topla tripsinizacija najčešće je korištena enzimska metoda za razgradnju stanica koja se odvija u uvjetima viših temperatura. Prije tretmana tripsinizacijom, željeno tkivo usitnjeno je na manje komade. Omogućuje jednostavan postupak razdvajanja. Usitnjeno tkivo se zatim ispere u posebnom mediju poznatom kao medij za bazalnu sol za disekciju.
Po završetku koraka pranja stanice se transformiraju u tikvicu koja sadrži aktivni enzim, a to je tripsin. Kao i ova tehnika uključuje toplu tripsinizacijom protokol je tripsin se nalazi pri temperaturi od oko 37 0 ° C tijekom oko četiri sata.
Slika 01: Tripsin
Sadržaj se miješa i miješa metodama centrifugiranja radi jednostavnosti protokola i ubrzavanja postupka razdvajanja. Kad se postigne preporučeno vrijeme, stanice se mogu izvesti iz supernatanta. Stanice izvedene iz supernatanta se tada inkubiraju na određenoj temperaturi i vremenu.
Što je hladna tripsinizacija?
Hladna tripsinizacija je druga vrsta tripsinizacije koja se odvija u hladnim uvjetima. U ovoj se tehnici stanice koje su nasjeckane i oprane stave u bočice na led, a zatim namoče tripsinom. Razdoblje namakanja je mnogo duže - oko 6 - 24 sata.
Nakon završetka postupka namakanja je tripsin uklonjen iz staničnog lizata, a komadići tkiva dalje se inkubiraju na 37 0 ° C oko 20 - 30 minuta. Dezagregacija stanica dolazi do ponovnog pipetiranja mješavine tkiva. To će omogućiti stanicama da se odvoje od membrane i dođu do supernatanta. Jednom kada su stanice u supernatantu, inkubiraju se i uzgajaju na željenoj temperaturi i vremenskom razdoblju.
Metoda hladnog tripsiniziranja ima nekoliko prednosti
- Veći prinos održivih stanica jer je oštećenje stanica minimalizirano. Oštećenje stanica minimizira se ne korištenjem koraka centrifugiranja.
- Izuzetno prikladna metoda.
- Manje naporan.
Glavno ograničenje metode hladne tripsinizacije je da se velike količine ne mogu koristiti u jednom slučaju.
Koje su sličnosti između tople i hladne tripsinizacije?
- I topli i hladni postupak tripsinizacije koriste enzim tripsin za razgradnju stanica.
- I postupci toplog i hladnog tripsiniziranja koriste se u postupcima stanične kulture za razgradnju stanica.
- I u postupcima liječenja toplom i hladnom tripsinizacijom stanice su izvedene iz supernatanta.
Koja je razlika između tople i hladne tripsinizacije?
Diff Article Sredina prije tablice
Toplo protiv hladne tripsinizacije |
|
| Topla tripsinizacija metoda je tretiranja stanica s tripsinom u toplim uvjetima na temperaturi od 36,5 - 37 0. | Hladna tripsinizacija je postupak obrade tripsinom koji se odvija u hladnijim uvjetima, po mogućnosti u ledu održavajući vrlo niske temperature. |
| Protokol | |
| Sjeckana Komadići tkiva su održavane na 37 0 ° C kontinuirano tijekom cijelog postupka. | Sjeckana Komadići tkiva inicijalno se održava na ledenom temperature i tada se održava na 37 ° C 0. |
| Temperatura | |
| Topla tripsinizacija događa se na 36,5 - 37 0 | Hladna tripsinizacija događa se na ledeno hladnim temperaturama. |
| Potrošeno vrijeme | |
| Manje vremena potrebno za čitav postupak (oko 4 sata) tople tripsinizacije. | Potrebno duže vrijeme (oko 6 - 24 sata) za hladnu tripsinizaciju. |
| Prinos održivih stanica | |
| Nisko u toploj tripsinizaciji. | Visoko u hladnoj tripsinizaciji. |
| Upotreba centrifugiranja | |
| Centrifugacija je potrebna za razdvajanje stanica u toploj tripsinizaciji. | Centrifugiranje nije potrebno u hladnoj tripsinizaciji. |
| Početna količina tkiva za tripsinizaciju | |
| Veća količina tkiva može se koristiti u toploj tripsinizaciji. | Manja količina tkiva može se koristiti u hladnoj tripsinizaciji. |
| Oštećenje stanica | |
| Visoko zbog centrifugiranja u toploj tripsinizaciji. | Manje zbog hladne trippsinizacije. |
Sažetak - Toplo protiv hladne trippsinizacije
Tripsinizacija je metoda korištenja enzima tripsina koji razgrađuje protein za razgradnju i pripremu primarnih staničnih kultura tijekom procesa uzgoja stanica. Dvije su glavne tehnike tripsinizacije na temelju temperatura korištenih tijekom postupka. To su topla i hladna tripsinizacija. Topla tripsinizacija provodi se na 37 0 C, dok se hladna tripsinizacija provodi u ledeno hladnim uvjetima. Iako hladnoj tripsinizaciji treba dulje vrijeme za završetak, kaže se da ima veći prinos održivih stanica. To je zbog činjenice da je oštećenje stanica minimalizirano hladnom tripsinizacijom, jer ne koristi snažne korake centrifugiranja. To je razlika između toplog i hladnog tripsiniziranja.
