Ključna razlika - Označivi marker nasuprot reporteru koji se može odabrati
Tehnika genetskog inženjeringa koristi se za prijenos važnih gena iz organizma u drugi organizam. Umetanje stranog gena u genom drugog organizma i stvaranje ekspresije unutar stanice domaćina najteži su koraci u prijenosu gena. Da bi se otkrio uspjeh procesa transformacije, u rekombinantnoj molekuli koriste se selektivni marker i reporter gen. Označivi marker je sekvenca DNA ili gen koji eksprimira i odabire transformirane stanice iz ne-transformiranih stanica. Reporter gen je drugi gen koji se koristi za razlikovanje transformiranih stanica i za kvantificiranje ili otkrivanje kako umetnuti gen funkcionira unutar domaćina. Ključna razlika između selektivnog markera i reporter gena je u tome što se selektivni marker koristi za screening ne-transformiranih stanica i za signaliziranje transformiranih stanica dok se reporter gen koristi za kvantificiranje razine ekspresije gena u domaćinu.
SADRŽAJ
1. Pregled i ključna razlika
2. Što je odabirljivi marker
3. Što je reporter gen
4. Usporedba - usporedba markera vs reporter gena
5. Sažetak
Što je označivač koji se može odabrati?
U genetskom inženjerstvu, gen koji se zanima ubacuje se u prikladni vektor i transformira u organizme domaćina. Međutim, transformacija je uspješna samo u nadležnim stanicama domaćina, a postoji mogućnost da stanice domaćini odbiju usvajanje stranog DNA. Stoga je diferencijacija transformiranih i ne-transformiranih stanica važna za nastavak daljnjeg eksperimentiranja. Stoga istraživači uključuju selektivni marker gen u vektor za lakši odabir transformiranih stanica iz ne-transformiranih stanica. Označivi marker je sekvenca DNA, posebno gen koristan za identifikaciju transformiranih stanica. Ovaj marker-gen pokazuje osobinu koja odgovara umjetnom odabiru transformiranih stanica iz ne-transformiranih stanica na mediju.
Najčešći selektivni biljezi koji se koriste u molekularnoj biologiji su geni otporni na antibiotike. Gen za rezistenciju na antibiotike ubacuje se u vektor i transformira u stanice domaćina, posebno u bakteriju domaćina. Taj se određeni antibiotik ugrađuje u rastni medij bakterije. Zbog prisutnosti selektivnog markera, u selektivnim uvjetima mogu preživjeti samo stanice koje sadrže odgovarajući selektivni marker. Netransformirane stanice ne mogu rasti u mediju koji sadrži antibiotike. Zbog toga se, zbog odabira markera koji je otporan na antibiotike, transformirane stanice lako identificiraju.
Geni koji daju osobine antimetabolitima, herbicidi se koriste kao selektivni biljezi u vektorima kloniranja u biljnom genetskom inženjerstvu. Međutim, ova kotransformacija selektivnih biljega u genetski modificirane organizme ima negativne učinke na okoliš i čovjeka. Oslobađanje bakterija otpornih na antibiotike može povećati otpornost antibiotika na ljudske patogene. Antibiotikom može kontaminirati proizvod ili biomasu i može izgubiti selektivni tlak kao rezultat razgradnje i inaktivacije antibiotika.
Slika 01: Plazmidni vektor za prijenos gena s selektivnim biljegom
Što je Reporter gen?
Reporter geni su geni koji omogućuju otkrivanje ili mjerenje ekspresije umetnutog gena. Ti se izvještajni geni mogu vezati za regulatorne sekvence gena od interesa kako bi signalizirali mjesto ili razine ekspresije. Stoga se tijekom ekspresije gena pod istim promotorom transkribiraju u jednu mRNA sekvencu, a zatim prevode u protein koji može ukazivati na razinu ekspresije gena.
Reporterski geni su različitih vrsta i sadrže vizualno prepoznatljive karakteristike koje su obično uključene u fluorescentne i luminiscentne proteine. Geni koji kodiraju fluorescentni protein i enzime, pretvaraju nevidljive supstrate u luminiscentne ili obojene proizvode signalizirajući uspješnu ekspresiju gena i pružajući mogućnost kvantificiranja ekspresije gena.
Slika 02: Ekspresija reporter gena
Koja je razlika između selektivnog markera i reporter gena?
Diff Article Sredina prije tablice
Označivi marker vs Reporter Gene |
|
| Označivi marker vrsta je sekvence DNA koja pomaže razlikovanju transformiranih stanica s ne-transformiranim stanicama. | Reporter gen je gen koji pomaže kvantificirati ekspresiju željenog gena umetnutog u stanicu domaćina. |
| Priroda proizvedenih jedinica | |
| Geni su kodirani karakteristikama koje pomažu u umjetnoj selekciji na rastućim medijima. | Geni su kodirani s vizualno prepoznatljivim karakteristikama. |
| Upotreba | |
| Geni otpornosti na antibiotike, geni antimetabolita, geni otpornosti na herbicide, itd. Primjeri su odabira markera. | Primjeri su kod gena za zeleni fluorescentni protein, β-glukuronidazu, kloramfenikol acetiltransferazu, crveni fluorescentni protein, itd. |
Sažetak - Odabirljivi marker vs Reporter Gene
Označivi koji se mogu odabrati transformiranim stanicama omogućuju rast u selektivnim medijima doziranim određenim antibiotikom ili herbicidom. Koriste se za rani odabir transformiranih stanica. Reporterski geni koriste se za kvantificiranje razine ekspresije željenog umetnutog gena. Također omogućuju razlikovanje transformiranih i ne transformiranih stanica. To je razlika između selektivnog markera i reporter gena. I selektivni marker i reporterski gen smatraju se važnim markerima u genetskom inženjerstvu.
