Razlika Između Sjevernog Južnog I Zapadnog Blotiranja

2024 Autor: Mildred Bawerman | [email protected]. Zadnja promjena: 2023-12-16 08:39

Ključna razlika - Sjeverni vs Južni vs Zapadni bloting

Otkrivanje specifičnih sekvenci DNA, RNA i proteina neophodno je za različite vrste studija u molekularnoj biologiji. Gel elektroforeza je tehnika koja razdvaja DNA, RNA i proteine prema njihovoj veličini. Iz gelskih profila određene se DNA sekvence, RNA sekvence ili proteini otkrivaju pomoću posebnih tehnika koje se nazivaju blotiranje i hibridizacija s obilježenim sondama. Postoje tri različite vrste mrljanja, naime južni, sjeverni i zapadni. Ključna razlika između sjevernog južnog i zapadnog blotanja leži u vrsti molekule koju otkriva u uzorku. Southern blot metoda je metoda koja otkriva određenu sekvencu DNA iz uzorka DNA. Northern bloting je tehnika koja otkriva određenu sekvencu RNA iz uzorka RNA. Western blot metoda je metoda koja otkriva određeni protein iz uzorka proteina.

SADRŽAJ

1. Pregled i ključna razlika

2. Što je bloting sa juga

3. Što je sa sjevernjacima

4. Što je sa zapadnjacima

5. Usporedba usporedivo - Sjeverni vs Južni protiv zapadnog blota

6. Sažetak

Što je Southern Blotting?

Tehniku Southern blotinga razvio je EM Southern 1975. godine za identifikaciju specifične sekvence DNA iz uzorka DNA. Ovo je prva tehnika mrljanja koja je uvedena u molekularnu biologiju. Omogućio je otkrivanje specifičnih gena iz DNK, specifičnih fragmenata iz DNK, itd. Nekoliko je koraka uključeno u tehniku satern blot-a. Oni su sljedeći.

1. DNA se izolira iz uzorka i probavi restrikcijskim endonukleazama.
2. Probavljeni uzorak odvaja se elektroforezom u agaroznom gelu.
3. Fragmenti DNA u gelu denaturiraju se u pojedinačne niti pomoću alkalne otopine.
4. Jednolančana DNA prenosi se na membranu filtra nitroceluloze kapilarnim prijenosom.
5. Prenesena DNA trajno je fiksirana na membranu.
6. Fiksirana DNA na membrani hibridizira se s obilježenim sondama.
7. Nevezana DNA se ispire s membrane ispiranjem.
8. Rentgenski film se izlaže membrani i priprema se autoradiograf.

Southern blot se primjenjuje za različite aspekte molekularne biologije. Koristan je u RFLP mapiranju, forenzičkim studijama, metilaciji DNA u ekspresiji gena, otkrivanju mutiranih gena u genetskim poremećajima, DNK otiscima prstiju itd.

Slika 01: Tehnika južnjačkog blottinga

Što je sjeverno pjegavanje?

Northern bloting je metoda dizajnirana za otkrivanje određene sekvence RNA ili sekvence mRNA iz uzorka za proučavanje ekspresije gena. Ovu su tehniku razvili Alwine, Kemp i Stark 1979. godine. Razlikuje se od tehnika sjevernjačkog i zapadnjačkog blotanja zbog nekoliko koraka. Međutim, ova se tehnika izvodi i gel gel elektroforezom, blotiranjem i hibridizacijom sa specifičnim obilježenim sondama i detekcijom. Northern blot tehnika izvodi se na sljedeći način.

1. RNA se ekstrahira iz uzorka i odvaja gel elektroforezom.
2. RNA se prenosi iz gela na upijajuću membranu i fiksira.
3. Membrana se tretira označenom sondom pripremljenom od cDNA ili RNA (sonda je komplementarna određenoj sekvenci u uzorku).
4. Sonda se inkubira s membranom da se veže određenim slijedom.
5. Nevezane sonde se isperu.
6. Hibridizirani fragmenti otkrivaju se autoradiografom.

Northern bloting važan je alat u otkrivanju i kvantificiranju hibridizirane mRNA, proučavanju razgradnje RNA, procjeni poluživota RNA, otkrivanju spajanja RNA, proučavanju ekspresije gena itd.

Slika 02: Sjeverna mrlja

Što je Western Blotting?

Western blot metoda je metoda otkrivanja specifičnog proteina iz proteinske smjese uporabom obilježenih antitijela. Stoga je Western blot poznat i kao imunoblot. Ovu tehniku predstavili su Towbin i suradnici 1979. godine i ona se sada rutinski izvodi u laboratorijima za analizu proteina. Koraci su sljedeći.

1. Iz uzorka se ekstrahiraju proteini
2. Proteini se odvajaju po veličini elektroforezom u poliakrilamidnom gelu
3. Odvojene molekule elektroporacijom se prenose u PVDF membranu ili nitroceluloznu membranu
4. Membrana je blokirana zbog nespecifičnog vezanja s antitijelima
5. Preneseni proteini povezani su s primarnim antitijelima (enzimima obilježena antitijela).
6. Membrana se pere kako bi se uklonila nespecifično vezana primarna antitijela
7. Vezana antitijela otkrivaju se dodavanjem supstrata i otkrivanjem obojenog taloga

Western blot korisno je u otkrivanju anti-HIV antitijela u uzorku humanog seruma. Western blot također se može koristiti kao potvrdni test za infekciju hepatitisom B i konačni test za bolest ludih krava.

Slika 03: Western Blotting

Koja je razlika između sjevernog južnog i zapadnog blotiranja?

Diff Article Sredina prije tablice

Sjeverno vs Južno protiv Zapadno Blotting
Otkrivena vrsta molekule
Sjeverno blatting	Northern blotting otkriva određenu sekvencu RNA iz uzorka RNA.
Južnjačko brisanje	Southern blotting otkriva određenu sekvencu DNA iz uzorka DNA.
Western Blotting	Western blotting otkriva specifični protein iz uzorka proteina.
Vrsta gela
Sjeverno blatting	Za to se koristi gel od agaroze / formaldehida.
Južnjačko brisanje	Za to se koristi gel Agarose.
Western Blotting	Za to se koristi poliakrilamidni gel.
Metoda blottinga
Sjeverno blatting	Ovo je kapilarni prijenos.
Južnjačko brisanje	Ovo je kapilarni prijenos.
Western Blotting	Ovo je električni prijenos.
Korištene sonde
Sjeverno blatting	cDNA ili RNA sonde označene radioaktivno ili neradioaktivno.
Južnjačko brisanje	DNA sonde su označene radioaktivno ili neradioaktivno.
Western Blotting	Primarna antitijela koriste se kao sonde.
Sustav za otkrivanje
Sjeverno blatting	To se radi pomoću autoradiografa ili otkrivanja promjene svjetlosti ili boje.
Južnjačko brisanje	To se radi pomoću autoradiografa, otkrivanja promjene svjetlosti ili boje.
Western Blotting	To se radi pomoću otkrivanja promjene svjetlosti ili boje.

Sažetak - Sjeverno vs Južno protiv Zapadno Blotting

Blotting je posebna tehnika razvijena za identifikaciju specifične DNA, RNA ili proteina iz uzoraka. Postoje tri odvojena postupka blotiranja, naime sjeverni, južni i zapadni, za otkrivanje određene vrste molekule. Tehnika Northern blotinga dizajnirana je za otkrivanje određenog slijeda RNA iz smjese RNA. Southern blot tehnika omogućuje otkrivanje određene sekvence DNA iz uzorka DNA, a Western blot tehnika je razvijena za identificiranje određenog proteina iz proteinske smjese.